الكروماتوغرافيا 7

يعتمد مبدأ الفصل Separation Principle في الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء High Performance Liquid Chromatography (HPLC) على توزع مادة العينة Analyte (Sample)، بين الطور المتحرك أو الناقل Mobile Phase (المحل الساحب Eluent) والطور الثابت Stationary Phase (مادة تعبئة العمود Column Packing Material).

فبالاعتماد على بنية المادة الكيميائية Chemical Structure of the Analyte، فإن جزيئات المادة ستتأخر عن المواد الأخرى أثناء مرورها في الطور الثابت. وتدل تبادلات الأفعال النوعية Specific Intermolecular Interactions بين جزيئات العينة ومادة تعبئة العمود على الزمن الذي تقضيه العينة في العمود. ولذلك فإن المكونات المختلفة للعينة ستسحب بأزمان مختلفة، وبهذا يتم فصل مكونات العينة.

إن أي متغير Variable يؤثر على القوى بين الجزيئات Intermolecular Forces، سيؤثر على درجة الفصل Degree of Separation الذي يحصل عليه عن طريق العمود الكروماتوغرافي Chromatographic Column. ومن الصعب أن نطور نظرية كروماتوغرافيا Theory of Chromatography كاملة، لأنها بالأساس عملية لا توازنية (أو اتزانية)، ولأن سرعة تدفق المحل (المذيب) أكبر من أن تسمح بتوازن الجزيئات المنحلة Solute Molecules بين الطورين المتحرك (المحل الساحب) والثابت (مادة تعبئة العمود) Mobile and Stationary Phases.

يعتمد فصل Separation وتنقية Purification المركبات في الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)، على عدد من العوامل الفيزيائية Physical Parameters، التي يمكن أن تربط بعامل آخر بواسطة اعتبارات نظرية Theoretical Considerations.

حتى نحصل على عمليات فصل بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) ناجحة، من الضروري أن يكون عندنا فهم معقول Reasonable Understanding لهذه العوامل، وارتباطاتها ببعضها لنستطيع التغلب على مشاكل الفصل، وقد يكون ذلك باستخدام خاص للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء.

حتى يمكن إجراء عمليات فصل فعالة لمكونات العينة، من الضروري أن يكون لدينا فهم لما يشكله الفرق بين عمود جيد Good Column، وآخر سيء Bad Column بخصوص عملية التحليل المطلوبة. إن فعالية الفصل في العمود تعتمد على قطر العمود الداخلي Column Inner Diameter، وطول العمود Length of the Column، ونوع وحجم دقائق Type and Particle Size مادة تعبئة العمود Column Packing Material. إن سحب مكون Elution of a Component في عمود جيد يعطى بشكل عصابة حادة Sharp Band وضيقة Narrow، تمثل التمديد (التخفيف)الأدنى Minimal Dilution من تركيز العينة الأصلية Original Sample Concentration. وبالعكس، يسبب العمود السيء تمديداً كبيراً، ناشئاً عن سحب عصابة عريضة Elution of a Broad Band، مما ينتج عنه بالتالي تفريقاً ضعيفاً Little Resolution بين المكونات المختلفة.

بوابة المعرفة

أقرأ المقال التالي عن الكروماتوغرافيا: مكونات جهاز الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء